Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的步骤中逐渐扩展

从第一次用到胰脏自身上皮细胞到用到1型号冠心病临床副作用的十分困难所部在成年人时期就有很好的详细描述，多个胰脏自身上皮细胞阳性的成年人中会有70%在抗微叠加后10年内患上冠心病，而随访15年的成年人这一%减低到84%。值得注意，分之一临床1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的病症的系统还未获取合理的研究课题。

愈加多的人开始可用分期的系统来定义1型号冠心病的十分困难：个微在用到多种胰脏自身上皮细胞时转至第1期中，用到高血压极度时转至第2期中，用到副作用时转至第3期中。一些多发胰脏自身上皮细胞阳性的个微，在1期和2期，十分困难很太快，并发展为病症的1型号冠心病。我们先前详细描述了一一组在首次扫描到多种胰脏自身上皮细胞样本后大概10年无冠心病的近于太快十分困难者，这一组副作用总数少，但外观上非常明确。随后，我们发现胰脏自身上皮细胞酪氨酸CD8+T巨噬细胞催化在十分困难加速的副作用中会前提不存有，但在近期病症和长期存有的冠心病副作用中会很容易扫描到。这意味著表明，与十分困难副作用比起，这些副作用自身免疫催化的调节增强。

早期研究课题表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数目正常，但冠心病副作用存有一些新功能瑕疵，其中会都有对IL-2的催化能力减缓。此外，冠心病副作用中会的畸变CD4+T巨噬细胞意味著对调节更具抵抗性，体现为畸变T巨噬细胞的可抑制西移动，自然产生的Treg和微外产生的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T巨噬细胞中会IL-2催化西移动。本研究课题的目的是详细描述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在大群近于加速十分困难者中会的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法有：BOX研究课题是一项以人群辅以的斜向研究课题，在21岁以下造出院的副作用配偶中会检查1型号冠心病的危险性因素。我们先前详细描述了长期加速十分困难者的外观上，他们维持多重胰脏自身上皮细胞阳性超过10年，但未用到冠心病的临床副作用，太快性或非来癫痫自身免疫。随后，10名暂时维持无冠心病并愿意备有大量肠道样本的加速十分困难者纳入T和B巨噬细胞新功能了解研究课题。在目前为止的研究课题中会，8名太快十分困难者(SP一组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的胰脏自身上皮细胞阳性。所有的举例来说都正处于1型号冠心病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身上皮细胞对某些上皮细胞的阳性催化，然而，一名副作用已经正处于2期大概6年，但未用到临床副作用，一名副作用被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集检验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据了解研究课题中会对该遗传物质来进行了单独风险评估。分离外周血单个质长子巨噬细胞(PBMCs)，运用于多参数流式巨噬细胞法术和T巨噬细胞可抑制试验车风险评估遗传物质中会Treg的振幅、遗传和新功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重回)来进行无监督聚类了解研究课题，风险评估Treg遗传。

结果：与保健遗传物质比起，来自太快十分困难微的清醒CD4+T巨噬细胞的监督聚类推断，抑制的清醒CD4+ Treg振幅减低，与低剂量诱导的TNFR特别蛋白(GITR)表述减低有关。一名HbA1c升高的副作用与十分困难加速者和匹配的对照一组比起，Treg谱有所不同。新功能了解研究课题表明，与保健遗传物质比起，来自加速十分困难微的Treg介导的CD4+畸变T巨噬细胞可抑制微小受损。体现为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的可抑制减低。

由此可知1 了解的遗传了解研究课题推断，CD4+Treg病毒性号在太快十分困难路由表中会减低。由FlowSOM填充的Treg房，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示物表述鉴定造出10个元簇:清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)可用9个不同Treg标示填充的10个元簇的MST。每个路由器推选一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在路由器一组一处着色。每个路由器中会的饼由此可知暗示单个标示的表述级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以推断整微标示表述。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)填充由此可知，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说稀土元素为每个metacluster装有中央线由此可知(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP一组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T巨噬细胞(l)。深深蓝色带长子推选这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 可用CITRUS的预测模型号证明，Treg振幅的减低是十分困难加速的标志。分级门控(a - f)和柑橘了解研究课题(g-k)比起较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)长子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的推选性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述来进行分离，演示FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)一组以及遗传物质SP 606(深深蓝色)中会CD25+ cd127的振幅汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控长子集的装有中央线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述其中心可视，左下角凸显的簇被标识为SP和HD路由表彼此之间的不同。(j)装有中央线由此可知推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)一组中会，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说稀土元素(%)。(k)直方由此可知推断每个簇的遗传(粉红色)和Treg标示相对来说表述与剧中表述(深蓝色);上列，闪存Treg_3;一个大一行，闪存Treg_4。剧中与所有其他簇中会标示的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

由此可知3 与保健献血者比起，十分困难加速者清醒treg的GITR减低。每个清醒CD4+T巨噬细胞元簇(清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表述标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表述热由此可知(sp606不都有在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)的FlowSOM GITR表述联结，推断直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(深深蓝色)所有遗传物质都有，p< 0.05(深蓝色)遗传物质SP 606和匹配的HD不都有在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表述，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)联结，推断直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

由此可知4 来自加速十分困难的CD4+ treg巨噬细胞控制畸变CD4+T巨噬细胞的能力减缓。SP一组用深蓝色的中央线和带长子暗示，HD一组用粉红色的中央线和带长子暗示，深深蓝色的中央线/带长子暗示遗传物质sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标示为CFSE, Treg按观察的%起始。用抗CD3 /28微珠激活巨噬细胞，人才培养3紧接著来进行流式巨噬细胞法术扫描。(a-d)与CD4+转发者相对来说应的treg人才培养(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才培养。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE可抑制平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制平均值。可用阳性对照(抑制的响应巨噬细胞包含treg)计算可抑制平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差了解研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起较测试

由此可知5 畸变CD4+T巨噬细胞对加速十分困难的T巨噬细胞激活的可抑制更敏感。SP一组用深蓝色的中央线和带长子暗示，HD一组用粉红色的中央线和带长子暗示，深深蓝色的中央线/带长子暗示遗传物质sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示，treg按观察的%起始。用抗CD3 /28微珠激活巨噬细胞，人才培养3紧接著来进行流式巨噬细胞法术(CD25反染)和巨噬介导了解研究课题。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同人才培养。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE可抑制百分所部(b)。(c,d) CD25可抑制百分所部(c)和CD134可抑制百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中会的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差了解研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起较测试

结论：我们给造出的结论是，来自加速十分困难长子的激活清醒CD4+Treg在GITR表述中会获取了扩展和丰富，凸显了进一步研究课题Treg在1型号冠心病风险个微中会的差异性的必要性。

中文翻译造出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28