Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中随之扩展

从第一次注意到肝细胞自身HIV到注意到1DF高血压流行病学腹泻的令人满意率在婴幼儿初就有很好的描绘出，多个肝细胞自身HIV阴性的婴幼儿中会有70%在肝细胞转换后10短期内患上高血压，而随访15年的婴幼儿这一%-减小到84%。远比之下，占流行病学1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的复发机制还不会受益更进一步的研究工作。

越来越多的人开始用于仍须系统来定义1DF高血压的令人满意：性状在注意到多种肝细胞自身HIV时进入第1阶段，注意到低血糖异常时进入第2阶段，注意到腹泻时进入第3阶段。一些多发肝细胞自身HIV阴性的性状，在1期和2期，令人满意较更慢，并的发展为复发的1DF高血压。我们之前描绘出了一四组在首次验证到多种肝细胞自身HIV样品后至更少10年无高血压的极更慢令人满意者，这四组病人次数更少，但特征非常明确。随后，我们发现肝细胞自身上皮细胞特异性CD8+T抗原质反应在令人满意快速的病人中会基本不实际上，但在近期复发和近十年实际上的高血压病人中会很容易验证到。这可能会声称，与令人满意病人远比，这些病人自身免疫反应的抑制强化。

早期研究工作声称，尽管抑制性T抗原质(Treg)数量正常，但高血压病人实际上一些功能原因，其中会有数对IL-2的反应控制能力减低。此外，高血压病人中会的效应CD4+T抗原质可能会对抑制更具抵抗性，显出为效应T抗原质的抑制作用移向，纯净转化成的Treg和胃转化成的抑制Treg，以及上皮细胞随之而来的CD4+T抗原质中会IL-2反应移向。本研究工作的目的是描绘出了CD4+抑制性T抗原质(Treg)在一小群极快速令人满意者中会的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以族裔为基础的交叉研究工作，在21岁此表患病的病人亲友中会质子对1DF高血压的危险因素所。我们之前描绘出了近十年快速令人满意者的特征，他们保持良好多重肝细胞自身HIV阴性超过10年，但不会注意到高血压的流行病学腹泻，更慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续保持良好无高血压并愿意有数大量体液样品的快速令人满意者划定T和B抗原质功能系统性。在目前的研究工作中会，8名更慢令人满意者(SP四组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的肝细胞自身HIV阴性。所有的与会者都保持良好稳定1DF高血压令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身HIV对某些上皮细胞的阴性反应，然而，一名病人已经保持良好稳定2期至更少6年，但不会注意到流行病学腹泻，一名病人被检验为高血压，该病人72岁，在采集实验样品时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中会对该丝氨酸进行时了单独检验。分离外周血单个质子抗原质(PBMCs)，采用多参数流式抗原质精和T抗原质抑制作用试验检验丝氨酸中会Treg的高频率、表DF和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、举例来说和复归)进行时无监督聚类系统性，检验Treg表DF。

结果：与肥胖症丝氨酸远比，来自更慢令人满意体的思绪CD4+T抗原质的监督聚类说明了，转录的思绪CD4+ Treg高频率减小，与糖皮质激素抑制的TNFR相关抗原(GITR)暗示减小有关。一名HbA1c增大的病人与令人满意快速者和也就是说的样品远比，Treg谱有所完全相同。功能系统性声称，与肥胖症丝氨酸远比，来自快速令人满意体的Treg介导的CD4+效应T抗原质抑制作用明显损毁。显出为对效应CD4+T抗原质CD25和CD134暗示的抑制作用减小。

左图1 深入的表DF系统性说明了，CD4+Treg病毒性在更慢令人满意链表中会减小。由FlowSOM生成的Treg室，汇聚在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -抗原质上。根据标示出物暗示鉴别出10个元簇:思绪T抗原质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T抗原质;HLA-DR + GITR +思绪T抗原质;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用于9个完全相同Treg标示出生成的10个元簇的MST。每个终端代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在终端四组周围手绘。每个终端中会的饼左图对此单个标示出的暗示级别。(b)每个元聚类的热左图，以说明了基本标示出暗示。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的沙质。(e-l)整体而言同位素为每个metacluster木箱直通左图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP四组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T抗原质(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T抗原质(l)。蓝色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用于CITRUS的实测证实，Treg高频率的减小是令人满意快速的标志。分级除此以外(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP与会者和也就是说的HD与会者在CD4+CD45RA−T抗原质上的不同。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR暗示进行时分离，仿真FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及丝氨酸SP 606(蓝色)中会CD25+ cd127的高频率综合左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外子集的木箱直通左图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑橘簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度图例，交叉突出的簇被识别为SP和HD链表中间的完全相同。(j)木箱直通左图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组中会，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的整体而言同位素(%-)。(k)直方左图说明了每个簇的表DF(粉红色)和Treg标示出整体而言暗示与或多或更少暗示(紫色);上列，文件系统Treg_3;示意图悄悄，文件系统Treg_4。或多或更少与所有其他簇中会标示出的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检验

左图3 与肥胖症献血者远比，令人满意快速者思绪treg的GITR减小。每个思绪CD4+T抗原质元簇(思绪T抗原质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T抗原质;HLA-DR + GITR +思绪T抗原质;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个暗示标示出的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的暗示热左图(sp606不有数在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR暗示串联，说明了直方左图(c)和综合左图(d)。Wilcoxon匹配符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有丝氨酸有数，p< 0.05(紫色)丝氨酸SP 606和也就是说的HD不有数在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR暗示，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(蓝色)串联，说明了直方左图(e)和综合左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩检验

左图4 来自快速令人满意的CD4+ treg抗原质掌控效应CD4+T抗原质的控制能力减低。SP四组用紫色的直通和边框对此，HD四组用蓝色的直通和边框对此，蓝色的直通/边框对此丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T抗原质进行时分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示出为CFSE, Treg按仔细观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠抑制抗原质，培训3翌日进行时流式抗原质精验证。(a-d)与CD4+反之亦然者整体而言应的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培训。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。用于阴性对照(转录的作出反应抗原质另有treg)计算抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 效应CD4+T抗原质对快速令人满意的T抗原质抑制的抑制作用更敏感。SP四组用紫色的直通和边框对此，HD四组用蓝色的直通和边框对此，蓝色的直通/边框对此丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T抗原质进行时分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示出，treg按仔细观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠抑制抗原质，培训3翌日进行时流式抗原质精(CD25反染)和抗原质因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培训。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑制作用调升(b)。(c,d) CD25抑制作用调升(c)和CD134抑制作用调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大中会的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出的事实是，来自快速令人满意子的抑制思绪CD4+Treg在GITR暗示中会受益了拓展和充沛，强调了进一步研究工作Treg在1DF高血压可能会性性状中会的表型的必要性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28